name: Протеомное исследование изменений белкового состава аорты больных атеросклерозом: поиск и идентификация белковых аутоантигенов
keyword_list: атеросклероз белковые аутоантигены атипичные белковые фракции иммуноблоттинг двумерный электрофорез протеомные технологии
abstract: Одним из новых перспективных направлений биомедицинских исследований является протеомный анализ биологических жидкостей и тканей. Сравнение протеомов здорового человека и больного позволяет выявить конкретные белки, потенциально вовлеченные в развитие болезни, которые в дальнейшем могут стать мишенями для новых лекарственных препаратов. Кроме того, если такие белки уже известны, анализ протеома может использоваться как метод ранней диагностики. Целью нашего исследования являлось определить изменения белкового состава интимы и медиального слоя аорты (грудной отдел) больных атеросклерозом, выявить и идентифицировать аутоантигены с использованием протеомных технологий. Первым этапом работы было проведение исследования специфичности белкового состава интимы и медиального слоя аорты в тканях без атеросклеротического поражения. Анализ белкового состава ткани был проведен от 24 лиц, умерших вследствие ССЗ (75%) или вследствие других причин (25%). Были взяты более 100 образцов (ткань без атеросклеротического поражения и в соответствии стадиям атеросклероза). Сравнительный анализ белкового состава образцов без атеросклеротического поражения показал, что можно выделить 3 группы основных белков: специфичные для интимы (шесть белков), специфичные для медиального слоя (21 белок) и общие для обеих структур (68 белков), что позволило расширить базу идентифицированных белков «Протеомика мышечных органов». Затем в зоне атеросклеротического поражения аорты при проведении масс-спектрометрической идентификации наиболее часто выявлены накопления девяти белковых фракций: аполипопротеина А1, β-фибриногена, γ-фибриногена, макрофаг-кэппирующего белка, катепсина D, комплекса легких и тяжелых цепей ферритина, гаптоглобина, экстраклеточной супероксиддисмутазы и трансгелина, которые оказались атипичными. Отмечается варьирование уровня белковых фракций от отсутствия и/или следового количества в норме до выраженного накопления при стадии липофиброзной бляшки. Для выявления аутоантигенов среди белков аорты больных использовали «сэндвич» - модификацию иммуноблоттинга.  В качестве первых антител использовали сыворотки крови больных, а вторых пероксидазный коньюгат кроличьих антител против суммарных иммуноглобулинов человека. Белковые фракции, прореагировавшие как аутоантигены, отправляли на масс-спектрометрическую идентификацию. Во вторую часть исследования было включено 69 больных, которые были разделены на 3 группы. В 1-ю группу (n=17) были включены пациенты с начальным атеросклерозом магистральных артерий, в том числе и коронарных, основываясь на данных, полученных при коронарографии и дуплексном сканировании артерий. Критериями включения в группу были: стенозы не более 30%; Во 2-ю группу (n=37) пациенты с выраженным, распространенным атеросклерозом магистральных артерий. Критерии включения: стенозы 60% и более. В 3-ю группу (n=15) были включены молодые, условно здоровые, с интактными артериями. В группе 1 (n=17) с начальными проявлениями атеросклеротического процесса в 3-х сыворотках крови выявлен иммунный ответ на ламин А/С (LMNA), проларгин (PRELP), альфа-енолаза/лактадгерин (ENO1/MFGE8), лактадгерин (MFGE8). Статистически значимых достоверных корреляций между факторами риска ССЗ и биохимическими показателями не было выявлено. В группе 2 (n=37) с выраженным атеросклерозом иммунный ответ получен на трансгелин (TAGLN), лактадгерин (MFGE8), аполипопротеин А1(APOA1), ламин А/С (LMNA); проларгин (PRELP); альфа-енолаза/лактадгерин (ENO1/MFGE8); α-1 антитрипсин (SERPINA1); r-ras онкоген (RRAS); аннексин А4 (ANXА4). Выявлена достоверная умеренная корреляция между трансгелином (TAGLN) и курением r=0,46 (p<0,05); умеренная, статистически значимая корреляция с лактадгерином (MFGE8) r=0,38 (p<0,05), а также слабая, достоверная корреляция с r-ras онкогеном (RRAS) r=0,27 (p<0,05) и ИМ в анамнезе. Кроме того, выявлена достоверная, высокая корреляция между лактадгерином (MFGE8) и ОНМК в анамнезе r=0,71 (p<0,05). Статистически значимыми были корреляции между уровнем моно-СРБ и реакцией на трансгелин (TAGLN) r=0,49 (р<0,01), а также отрицательная достоверная корреляция между уровнем ХС-ЛВП и реакцией на трансгелин (TAGLN) r= - 0,42 (р<0,05). В 3 группе без признаков атеросклероза иммунных реакций ни на одну из представленных белковых фракций не наблюдалось. Таким образом, по результатам двумерного иммуноблоттига выявлены аутоантигены: ламин А/С (LMNA), проларгин (PRELP), альфа-енолаза/лактадгерин (ENO1/MFGE8), лактадгерин (MFGE8), трансгелин (TAGLN), аполипопротеин А1(APOA1), α-1 антитрипсин (SERPINA1), r-ras онкоген (RRAS), аннексин А4 (ANX А4). Ламин А/C (LMNA), проларгин (PRELP), лактадгерин (MFGE8) и трансгелин (TAGLN) могут рассматриваться как перспективные маркеры иммунного статуса для включения в систему стратификации при оценке степени атеросклероза. Проведенная нами исследовательская работа является одной из пилотных работ в Российской Федерации, необходимы дальнейшие исследования в более крупных выборках больных.
chairman_dissertation_council.name: Ирина
chairman_dissertation_council.surname: Чазова
chairman_dissertation_council.patronymic: Евгеньевна
chairman_dissertation_council.position: Заместитель генерального директора по научно-экспертной работе
chairman_dissertation_council.degree: Доктор медицинских наук
chairman_dissertation_council.rank: Академик
chairman_dissertation_council.wos_research_id: B-8688-2017
chairman_dissertation_council.scopus_author_id: 7004692881
chairman_dissertation_council.rinc_id: 106611
chairman_dissertation_council.territory: РОССИЯ
organization_supervisor.name: Сергей
organization_supervisor.surname: Бойцов
organization_supervisor.patronymic: Анатольевич
organization_supervisor.position: Генеральный директор
organization_supervisor.territory: РОССИЯ
rubrics.code: 76.03.31
rubrics.name: Медицинская биохимия
rubrics.code: 76.03.55
rubrics.name: Медицинская иммунология
rubrics.code: 76.29.30
rubrics.name: Кардиология и ангиология
oecds.code: 03.02.DQ
oecds.name: CARDIAC & CARDIOVASCULAR SYSTEMS
speciality_codes.name: Биохимия
speciality_codes.code: 03.01.04
speciality_codes.name: Кардиология
speciality_codes.code: 14.01.05
supervisors.fio: Наумов Владимир Геннадьевич
supervisors.scientific_degree: Доктор медицинских наук
supervisors.speciality_code: Кардиология
supervisors.responsible_type: Научный руководитель
supervisors.fio: Ковалев Леонид Иванович
supervisors.scientific_degree: Доктор биологических наук
supervisors.speciality_code: Биохимия
supervisors.responsible_type: Научный руководитель
opponents.fio: Затейщиков Дмитрий Александрович
opponents.scientific_degree: Доктор медицинских наук
opponents.speciality_code: Кардиология
opponents.responsible_type: Оппонент
opponents.fio: Метельская Виктория Алексеевна
opponents.scientific_degree: Доктор биологических наук
opponents.speciality_code: Биохимия
opponents.responsible_type: Оппонент
protection_organization.short_name: ФГБУ "НМИЦ кардиологии" Минздрава России
protection_organization.name: Фeдеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации
protection_organization.ogrn: 1037739144640
protection_organization.organization_type: Организация
protection_organization.okogu: Министерство здравоохранения Российской Федерации
protection_organization.okopf: Федеральные государственные бюджетные учреждения
author_organization.short_name: ФГБУ "НМИЦ кардиологии" Минздрава России
author_organization.name: Фeдеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации
author_organization.ogrn: 1037739144640
author_organization.organization_type: Организация
author_organization.okogu: Министерство здравоохранения Российской Федерации
author_organization.okopf: Федеральные государственные бюджетные учреждения