name: Фармакологическое изменение иммунотропной и противовоспалительной активности секретома мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток
keyword_list: воспаление цитокины дексаметазон эритропоэтин вальпроевая кислота мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки
abstract: Объект исследования: секретом мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК). Цель работы: повышение иммунорегуляторной и противовоспалительной активности ММСК путём фармакологической модуляции клеток in vitro. Методы исследования: ММСК выделяли из липоаспирата здоровых доноров с применением раствора коллагеназы 2 типа. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли из венозной крови здоровых добровольцев в двойном градиенте плотности фиколла (Клаус Дж., 1990). Фармакологически индуцированные ММСК (ФИМСК) получали обработкой 1 МЕ/мл эритропоэтина (ЭПО), 20 мкг/мл вальпроевой кислоты (ВК) или 10-5 моль/л дексаметазона (ДЕКС) в течение 3 часов. Клетки отмывали от препаратов фосфотно-солевым буфером. Часть клеток не обрабатывали препаратами. Через 48 ч супернатанты собирали, концентрировали ультрафильтрацией с отсечением по молекулярной массе 3 кДа. Для опытов in vitro секретом стандартизовали по количеству общего белка, который измеряли на фотометре. Для опытов in vivo секретом стандартизовали по количеству галектина-1, его концентрацию определяли иммуноферментным анализом. Секретом стерилизовали фильтрацией. Концентрации цитокинов, продуцируемых МНК под влиянием секретомов, определяли с помощью мультиплексного анализа. Определение экспрессии донорскими МНК Ki-67 и phospho-NF-κB p65 проводили на проточном цитофлуориметре. МТТ-тест использовали в качестве теста на токсичность. Для моделирования адъювантного артрита самкам крыс вводили 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда в плантарную поверхность задних лап, ведение повторяли через неделю. Лечение проводили подкожным введением 100 мкл секретома ММСК или секретома ММСК, обработанных ДЕКС. В качестве контроля использовался физиологический раствор. Задние левые лапы оставались без лечения. Отёк лап измеряли с помощью электронного штангенциркуля. В качестве индуктора контактно-аллергического дерматита (КАД) использовали 3% раствор динитрофторбензола (ДНФБ), 1% раствор ДНФБ в оливковом масле, 200 мкл которого наносили на депилированную кожу верхней половины спины самок крыс. Лечение проводили через 6 суток ежедневным однократным нанесением на область правой лопатки мази с 0,025% фторцинолоном, детского крема с секретомом ММСК или ММСК обработанных ДЕКС. Детский крем наносили всем животным на область левой лопатки. Для визуальной оценки степени воспаления кожных покровов использовали балльную систему: 0 баллов – нет признаков воспаления, 1 балл – минимальное воспаление, с легкой гиперемией, шелушением, 2 балла – умеренное воспаление с инфильтрацией, выраженным шелушением, единичными серозногеморрагическими корками, 3 балла – выраженное воспаление, с множественными гнойно-геморрагическими корками, эрозиями, язвами, выраженной инфильтрацией. Полуколичественно оценивали степень лимфоцитарной инфильтрации дермы в гистологических препаратах: слабая – до 5 лимфоцитов в площади сосочкового слоя; умеренная/средняя – 5-10 лимфоцитов; сильная/выраженная – больше 10 лимфоцитов. Достигнутые результаты: Продукция цитокинов IL-1β, IL-6, TNFα, IFNγ, IL-10, IL-1ra МНК in vitro под действием секретома ФИМСК, обработанных ДЕКС, снижается статистически более значимо, чем под действием секретома нативных ММСК. Секретом как нативных, так и индуцированных in vitro дексаметазоном ММСК, обладает провоспалительными эффектами при подкожном введении на модели адъювантного артрита. Оптимальной концентрацией дексаметазона для обработки ММСК in vitro с целью усиления их иммунорегуляторного и противовоспалительного действия, является 10-5 моль/л, оптимальный срок сбора секретома ММСК – 2 сутки культивирования. Обработка ММСК дексаметазоном в диапазоне доз 10-6 -10-4 моль/л в течение 3 часов не токсична для клеток. Секретом ФИМСК снижает экспрессию Ki-67, серкетом ММСК снижает экспрессию phospho-NF-κB p65 в МНК in vitro. Новизна: Впервые изучено влияние секретома ФИМСК на продукцию цитокинов МНК. Впервые определено влияние секретома ФИМСК на экспрессию phospho-NF-kB p65 в МНК. Впервые показана способность секретома ФИМСК при местном применении подавлять активность воспалительного процесса на модели КАД. Внедрение: результаты диссертационного исследования внедрены в учебно-методическую и научно-исследовательскую деятельность кафедры фармакологии и клинической фармакологии НИУ «БелГУ». Эффективность: Секретом индуцированных in vitro ДЕКС человеческих ММСК при местном применении способствует значимому снижению воспаления кожи на модели КАД у крыс, с купированием клинических симптомов на 1 сутки раньше, чем при использовании секретома нативных ММСК и фторцинолона, сопровождаясь более выраженным снижением индекса лимфоцитарной инфильтрации по сравнению с применением фторционолона. Область применения: фармакология, клиническая фармакология.
chairman_dissertation_council.name: Михаил
chairman_dissertation_council.surname: Покровский
chairman_dissertation_council.patronymic: Владимирович
chairman_dissertation_council.position: Заведующий кафедрой фармакологии и клинической фармакологии
chairman_dissertation_council.degree: Доктор медицинских наук
chairman_dissertation_council.rank: Профессор
chairman_dissertation_council.wos_research_id: A-4427-2017
chairman_dissertation_council.scopus_author_id: 6602105777
chairman_dissertation_council.territory: РОССИЯ
organization_supervisor.name: Николай
organization_supervisor.surname: Репников
organization_supervisor.patronymic: Иванович
organization_supervisor.position: Проректор по науке и инновациям
organization_supervisor.territory: РОССИЯ
rubrics.code: 76.03.55
rubrics.name: Медицинская иммунология
rubrics.code: 34.45.21
rubrics.name: Частная фармакология
rubrics.code: 34.45.05
rubrics.name: Методы доклинического исследования и отбора лекарственных средств
oecds.code: 03.01.NI
oecds.name: IMMUNOLOGY
oecds.code: 03.01.TU
oecds.name: PHARMACOLOGY & PHARMACY
oecds.code: 03.01.QA
oecds.name: MEDICINE, RESEARCH & EXPERIMENTAL
speciality_codes.name: Фармакология, клиническая фармакология
speciality_codes.code: 3.3.6.
supervisors.fio: Бурда Ю.Е.
supervisors.scientific_degree: Кандидат медицинских наук
supervisors.speciality_code: Аллергология и иммунология
supervisors.responsible_type: Научный руководитель
opponents.fio: Сагарадзе Г.Д.
opponents.scientific_degree: Кандидат биологических наук
opponents.speciality_code: Фармакология, клиническая фармакология
opponents.responsible_type: Оппонент
opponents.fio: Пахомова А.В.
opponents.scientific_degree: Доктор медицинских наук
opponents.speciality_code: Фармакология, клиническая фармакология
opponents.responsible_type: Оппонент
protection_organization.short_name: ФГАОУ ВО "Белгородский государственный национальный исследовательский университет", НИУ "БелГУ"
protection_organization.name: Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет"
protection_organization.ogrn: 1023101664519
protection_organization.organization_type: Организация
protection_organization.okogu: Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
protection_organization.okopf: Федеральные государственные автономные учреждения
author_organization.short_name: ФГАОУ ВО "Белгородский государственный национальный исследовательский университет", НИУ "БелГУ"
author_organization.name: Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет"
author_organization.ogrn: 1023101664519
author_organization.organization_type: Организация
author_organization.okogu: Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
author_organization.okopf: Федеральные государственные автономные учреждения