name: Оптимизация процессов селекции и культивирования клеток линии СНО, продуцирующих рекомбинантные антитела против фактора некроза опухоли-альфа человека
keyword_list: CHO антитела ФНО-а клонирование культуры-продуцента подкормка
abstract: Целью работы являлось исследование способов повышения продуктивности биосинтеза антител в клеточных линиях на основе СНО DG44, дефицитной по гену дигидрофолатредуктазы dhfr, с применением двух групп экспрессионных плазмид, а также усовершенствованных методик культивирования. Созданы две пары конструкций (биплазмидная и бипромоторная), были получены линии клеток, стабильно экспрессирующие рекомбинантные антитела к ФНО-альфа человека, оптимизирована стратегия получения и культивирования стабильных продуцентов рекомбинантных антител. Установлено, что на ранних этапах получения стабильной клеточной линии сравнимый уровень продуктивности культуры может быть достигнут при использовании как биплазмидной, так и бипромоторной систем экспрессии. Для достижения высокого уровня продуктивности при концентрации селективного агента метотрексата более 500 нМ оптимальным является использование биплазмидной конструкции, в том числе в сочетании с проведением цитосортировки родительской культуры и клонального отбора. Добавление рекомбинантных белков инсулина, трансферрина и человеческого сывороточного альбумина позволило повысить продуктивность стабильной культуры-продуцента рекомбинантных антител на основе клеток линии CHO на 44% по сравнению с используемой комплексной коммерческой добавкой ITS. Внесение в разработанную среду гидролизатов белков гороха и риса, содержащих пептиды с молекулярной массой ниже 5 кДа, позволило увеличить продуктивность линии на основе клеток CHO в 3,9 и 4,5 раза, соответственно.
chairman_dissertation_council.name: Владимир
chairman_dissertation_council.surname: Попов
chairman_dissertation_council.patronymic: Олегович
chairman_dissertation_council.position: научный руководитель Центра
chairman_dissertation_council.degree: Доктор химических наук
chairman_dissertation_council.rank: Академик
chairman_dissertation_council.wos_research_id: F-8810-2014
chairman_dissertation_council.scopus_author_id: 7404534215
chairman_dissertation_council.rinc_id: 80944
chairman_dissertation_council.orcid: 0000-0002-0133-7962
chairman_dissertation_council.territory: РОССИЯ
organization_supervisor.name: Алексей
organization_supervisor.surname: Федоров
organization_supervisor.patronymic: Николаевич
organization_supervisor.position: директор
organization_supervisor.territory: РОССИЯ
rubrics.code: 62.33.31
rubrics.name: Культивирование клеток и тканей человека и животных
rubrics.code: 31.27.25
rubrics.name: Биохимия животных
oecds.code: 01.06.CQ
oecds.name: BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
speciality_codes.name: Биохимия
speciality_codes.code: 03.01.04
supervisors.fio: Долгих Д.А.
supervisors.scientific_degree: Доктор биологических наук
supervisors.speciality_code: Молекулярная биология
supervisors.responsible_type: Научный руководитель
supervisors.fio: Алиев. Т.К.
supervisors.scientific_degree: Кандидат химических наук
supervisors.speciality_code: Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)
supervisors.responsible_type: Научный руководитель
opponents.fio: Шемякин И.Г.
opponents.scientific_degree: Доктор биологических наук
opponents.speciality_code: Микробиология
opponents.responsible_type: Оппонент
opponents.fio: Воробьева Н.Е.
opponents.scientific_degree: Кандидат биологических наук
opponents.speciality_code: Молекулярная биология
opponents.responsible_type: Оппонент
protection_organization.short_name: ФИЦ БИОТЕХНОЛОГИИ РАН
protection_organization.name: ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР "ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ" РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК"
protection_organization.ogrn: 1037700131633
protection_organization.supervisor_name: АЛЕКСЕЙ
protection_organization.supervisor_surname: ФЕДОРОВ
protection_organization.supervisor_patronymic: НИКОЛАЕВИЧ
protection_organization.organization_type: Организация
protection_organization.okogu: Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
protection_organization.okopf: Федеральные государственные бюджетные учреждения
author_organization.short_name: ИБХ РАН
author_organization.name: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук
author_organization.ogrn: 1037739009110
author_organization.organization_type: Организация
author_organization.okogu: Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
author_organization.okopf: Федеральные государственные бюджетные учреждения